[背景]:原肌球蛋白受体激酶 A (TrkA), 又名神经营养性酪氨酸激酶 1 型受体(NTRK1), 是神经营养因子酪氨酸激酶受体家族(NTRK)中的一员。 TrkA 是一个膜结合受体, 一旦结合神经营养因子, 自身就会发生磷酸化以及磷酸化 MAPK 途径的成员。 TrkA 介导神经生长因子的多种功能,包括神经元分化和程序性细胞死亡的规避。 TrkA 的存在导致细胞分化, 可能在感觉神经元亚型的定向分化中起作用。 该基因突变与先天性无痛无汗症、自残行为、 精神发育迟滞和癌症有关。 TrkA 在疼痛接收系统的发育和功能以及通过出汗的热调节建立中起重要作用。它也可通过 SHC1-或者 PLC-γ-1依赖的信号途径来激活 ERK1。 TrkA 的缺失将引发先天性无痛无汗症和甲状腺乳头状癌。 [检测原理]:本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人TrkA单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的TrkA与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 (streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中TrkA浓度成正比。加入终止液终止反应,在 450 nm 波长测定吸光度值。 [实验方法]:双抗夹心ELISA(定量) [样本类型]:血清、血浆、细胞上清、组织等相关生物样本。 [规格型式]:96孔板、48孔板,可拆卸 [保存条件]:试剂盒未拆开,2-8℃保存。已拆开,标准品-20℃保存,其它2-8℃℃保存。 [有效期]:6个月。 [检测范围]:468.73-30000pg/ml。 [灵敏度]:24.0pg/mL。敏感性/最低检测浓度计算方式:敏感性等于20个空白对照孔的平均O.D.值加上2个标准差后对应的浓度。样品的O.D.读数只有在高过敏感性指标的时候才具有统计学显著性。 [变异系数]:板内变异系数<10%,板间变异系数<15%。 [回收率]:三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。 [需用户自己提供的实验器材和试剂]: 1. 96孔读板仪器。 2. 自动洗板机. 3. 移液器和枪头。建议使用多通道移液器/排枪。 4. Eppendorf 管。 5. 额外洗板缓冲液 (neutral PBS 或 TBS。试剂盒内提供足量。如需额外缓冲液可参考如下配方)。 0.01M TBS: Add 1.2g Tris, 8.5g Nacl; 450μl of purified acetic acid or 700μl of concentrated hydrochloric acid to 1000ml H2O and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L. 0.01M PBS: Add 8.5g sodium chloride, 1.4g Na2HPO4 and 0.2g NaH2PO4 to 1000ml distilled water and adjust pH to 7.2-7.6. Finally, adjust the total volume to 1L. *样品准备的相关试剂也不含在试剂盒中。
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